在生物学和医学研究中，MTT（甲臜四氮唑蓝）实验是一种广泛使用的细胞活性检测方法。它通过测量细胞代谢过程中产生的甲臜产物的吸光度来评估细胞的存活率或增殖能力。以下是进行MTT实验的具体步骤：

1. 准备实验材料：

- 确保所有试剂和耗材都已准备好，包括培养基、MTT溶液（通常为5mg/ml），以及96孔板等。

- 细胞培养所需的所有设备也需提前检查并消毒。

2. 细胞接种：

- 根据实验需求将适量的细胞悬液加入到96孔板中，每孔接种一定数量的细胞（例如10,000个细胞/孔），并设置空白对照组。

- 将96孔板放入恒温培养箱中孵育一段时间（通常是24小时），让细胞贴壁生长。

3. 药物处理：

- 在细胞贴壁后，向各孔添加不同浓度的待测药物或其他处理因子，每个浓度设置多个重复样本。

- 同时保留未处理的正常对照组。

4. MTT添加与反应：

- 在指定时间点（如24小时或48小时）去除培养基，并向每孔加入新鲜配制的MTT溶液（通常是10μl/孔）。

- 让细胞继续孵育约4小时，期间细胞会代谢MTT形成紫色甲臜晶体。

5. 溶解甲臜晶体：

- 孵育结束后，小心地吸去上清液，并加入适当的溶剂（如DMSO）以完全溶解形成的甲臜晶体。

- 轻轻振荡确保充分混合，避免产生气泡。

6. 吸光度测定：

- 使用酶标仪在特定波长（通常为570nm）下测量各孔的吸光度值。

- 对于空白对照孔，记录其吸光度作为背景值扣除。

7. 数据分析：

- 根据所得数据计算细胞存活率或增殖指数。

- 可绘制剂量-效应曲线或比较不同条件下的相对吸光度变化。

通过以上步骤，可以准确地评估细胞对特定因素的响应情况。需要注意的是，在整个操作过程中要严格控制变量，确保实验结果具有可靠性和可重复性。此外，还需注意无菌操作，防止污染影响实验结果。